淺析核酸檢測PCR試劑盒的作用與意義所在

　　核酸檢測PCR試劑盒和紫外凝膠成像系統(tǒng)(紫外分析儀或手提紫外等)以及移液器都可能影響PCR檢測的質(zhì)量。PCR儀是控制PCR反應(yīng)溫度變化的，其溫度和控制時(shí)間的準(zhǔn)確程度可能會影性PCR檢測質(zhì)量。移液器取液的準(zhǔn)確程度影響反應(yīng)體系是否能達(dá)到反應(yīng)環(huán)境。紫外分析系統(tǒng)對檢測敏感性有明顯的影響。紫外分析系統(tǒng)有3種類型儀器：紫外分析儀、紫外凝膠成像系統(tǒng)、手提紫外燈。紫外分析儀直接用眼睛觀察瓊脂糖凝膠上DNA擴(kuò)增帶。
 

　　紫外凝膠成像系統(tǒng)是在計(jì)算機(jī)上通過攝像系統(tǒng)對瓊脂糖凝膠上DNA擴(kuò)增帶進(jìn)行觀察。手提紫外燈可以在電泳過程中直接對瓊脂糖凝膠上DNA擴(kuò)增帶進(jìn)行觀察，使用方便，分辨率比較低。依據(jù)這些儀器的分辨率由高到低順序是紫外分析儀、紫外凝膠成像系統(tǒng)、手提紫外燈。紫外分析儀有時(shí)能看到弱陽性擴(kuò)增帶，在紫外凝膠成像系統(tǒng)上卻看不到。手提紫外燈只有在陽性擴(kuò)增帶比較亮?xí)r才能看到，建議為保證檢測質(zhì)量建議不用手提紫外燈，可用于臨時(shí)的電泳結(jié)果觀察。
 

　　核酸檢測PCR試劑盒適用于以RNA為模板合成cDNA的反轉(zhuǎn)錄，以及后續(xù)的PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。選用優(yōu)異的M-MLVRT酶，可以合成大于5kb的cDNA；反轉(zhuǎn)錄過程中的特異的RNase抑制劑可有效降低由于外源RNase污染而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的風(fēng)險(xiǎn)。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于cDNA克隆及目的基因檢測等分子生物實(shí)驗(yàn)。
 

　　測定RNA濃度按以下步驟進(jìn)行操作：
 

　　(1)取1u1RNA原液，放在0.5mlEP管中，加入249u1ddH20，用移液槍反復(fù)混勻。
 

　　(2)用ddH20為空白對照，調(diào)節(jié)A260零點(diǎn)。
 

　　(3)倒掉比色杯中的水，加入稀釋并混合均勻的RNA樣液，測定A260值。倒掉比色杯中的RNA樣液，用ddH20沖洗比色杯，再調(diào)節(jié)A280零點(diǎn)。
 

　　(4)倒掉比色杯中的水，加入稀釋并混合均勻的RNA樣液，測定A280值。計(jì)算A260/A280比值，比值≥1.8，滿足實(shí)驗(yàn)要求。
 

　　(5)RNA原液濃度=A260×稀釋倍數(shù)×40(ng/u1)。