宮頸上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

人宮頸上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物是從人宮頸上皮細胞和腫瘤細胞中提取的，人宮頸上皮細胞和腫瘤細胞分別從正常人宮頸組織和腫瘤組織中制備。正常人宮頸組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備宮頸上皮細胞和腫瘤原代組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，進口來源，保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

46.9pg/mlMalonic Acid；二胃蛋白酶原C檢測試盒

0.469ng/mlGinsenoside Rg3；人參皂苷Rg3胃蛋白酶原A檢測試盒

0.094ng/mlSweroside；獐牙菜苷/當藥苷胃蛋白酶檢測試盒

0.375ng/mlNarirutin；蕓香柚皮苷胃癌抗原MG7-Ag ELISA試盒

0.094ng/mlSodium phytate；植鈉胃癌標志物ELISA試盒

0.188ng/mlLauric acid；正十二/月桂尾肢同源蛋白2檢測試盒

46.9pg/mlVinblastine Sulfate；長春尾加壓素Ⅱ ELISA試盒

0.375ng/mlOxalic acid/Ethanedioic acid；無水草維生素K依蛋白Z檢測試盒

0.094ng/mlTelmisartan；替米沙坦維生素K1檢測試盒

0.188ng/mlHispidulin；高車前素維生素H檢測試盒
宮頸上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物腎素(REN)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)4-(2-噻唑基偶)間苯二酚

組織因子(TF)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鈷試(1-亞硝基-2-萘酚)

內(nèi)皮素1(EDN1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)氯磺酚S

半胱氨蛋白酶抑制3(CST3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)三苯基苯酚

骨橋素(OPN)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)1-萘酚

前列腺素E1(PGE1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鄰硝基苯酚

前列腺素E合酶2(PTGES2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)對硝基苯酚

前列腺素E合酶2(PTGES2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)對苯二酚

銅藍蛋白(CP)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)愈創(chuàng)木酚

醛固(ALD)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)萘酚AS

小板因子4(PF4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)α-萘酚醌苯基

熱休克轉(zhuǎn)錄因子4(HSF4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2-（5--2-吡啶偶）-5-（二氨基）苯酚

小板因子4(PF4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)蒽(AR)

小板因子4(PF4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)代米氏

維生素K1(VK1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)茚三，一水